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本试剂盒采用CT Conversion Reagent将基因组DNA中的未甲基化的胞嘧啶转变成胸腺嘧啶，并通过Desulfonation buffer去磺化，采用磁珠法回收得到转化的DNA，获得DNA的OD260/OD280比值一般为1.7～1.9，回收的修饰DNA可直接用于BSP和MSP检测等。

• CT转化效率高。
  
• DNA样品纯度好，无抑制或者干扰后续实验反应。
  
• 获得的DNA完整，无断裂与降解。

• 向CT Conversion Reagent中加入900μL ddH2O,300μL Dilution buffer 1和50μL Dilution buffer 2。
  
• 颠倒混匀10min，使其充分溶解，并做好标记。
  ● 10min之后若不能完全溶解，可适当延长颠倒混匀的时间；
  ● CT Conversion Reagent溶解在溶液中之后，为了保证理想的效果，请立即使用；
  ● CT Conversion Reagent solution 4℃可避光保存一周，-20℃可避光保存4周。
  
• 取一支PCR管，加入200～500ng DNA样品，若体积不足20μL，加ddH2O补足至20μL，充分混匀。
  ● 本试剂盒起始基因组DNA的用量为100～1000ng，为了获取最佳的转化效果，推荐起始基因组DNA的使用量为500ng。
  
• 向上述PCR管中加入208μL CT Conversion Reagent solution充分温和混匀，并按照下列程序进行反应：
  ① 98℃ 10min
  ② 98℃ 30 s
  ③ 60℃ 150min
  
• 将上述反应溶液转入新的1.5mL离心管中，向管中加入240μL Buffer P3和30μL MethMag beads磁珠，充分温和混匀，室温结合3min，间或混匀。
  ● 加入MethMag beads之前，将其充分混匀；
  ● 请务必将MethMag Beads加至液面以下，尽量将枪头上残留MethMag Beads吸打干净。
  
• 将离心管放于磁力架上，静置1min，至溶液澄清，并弃去上清。
  ● 吸弃上清前，若管口粘有少量MethMag Beads，请用上清液将其洗至离心管内，以确保所有MethMag Beads吸附至管壁上；
  ● 吸弃上清时，请勿吸入MethMag Beads，尽量吸净上清；
  ● 从磁力架上取出离心管后，若有少量上清，请将离心管置于磁力架上，再次吸取上清。
  
• 向上述离心管中加入700μL 70%乙醇，充分温和混匀。
  
• 将离心管放于磁力架上，静置1min，至溶液澄清，并弃去上清。
  ● 吸弃上清前，若管口粘有少量MethMag Beads，请用上清液将其洗至离心管内，以确保所有MethMag Beads吸附至管壁上；
  ● 吸弃上清时，请勿吸入MethMag Beads，尽量吸净上清；
  ● 从磁力架上取出离心管后，若有少量上清，请将离心管置于磁力架上，再次吸取上清。
  
• 向上述离心管中加入200μL Desulfonation buffer，充分温和混匀，室温放置20min，间或混匀。
  
• 将离心管放于磁力架上，静置1min，至溶液澄清，并弃去上清。
  ● 吸弃上清前，若管口粘有少量MethMag Beads，请用上清液将其洗至离心管内，以确保所有MethMag Beads吸附至管壁上；
  ● 吸弃上清时，请勿吸入MethMag Beads，尽量吸净上清；
  ● 从磁力架上取出离心管后，若有少量上清，请将离心管置于磁力架上，再次吸取上清。
  
• 向上述离心管中加入700μL 70%乙醇，充分温和混匀。
  
• 将离心管放于磁力架上，静置1min，至溶液澄清，并弃去上清。
  ● 吸弃上清前，若管口粘有少量MethMag Beads，请用上清液将其洗至离心管内，以确保所有MethMag Beads吸附至管壁上。
  ● 吸弃上清时，请勿吸入MethMag Beads，尽量吸净上清。
  ● 从磁力架上取出离心管后，若有少量上清，请将离心管置于磁力架上，再次吸取上清。
  
• 重复步骤11～12。
  
• 磁珠室温干燥15min或者55℃烘箱干燥5min。
  ● 干燥前，请尽量吸净管内的液体。
  ● 干燥前，若出现液体挂壁现象，可将离心管短暂离心之后，再将其置于磁力架上，待所有MethMag Beads完全吸至管壁之后再吸净管内液体。
  
• 加入15～30μL TE Buffer（pH8.0），充分混匀，65℃水浴5min，间或混匀。
  ● 如果想提高DNA的得率，可将TE Buffer 65℃预热。
  
• 将离心管放于磁力架上静置1min，至溶液澄清，吸取上清至新的离心管中，得到的DNA溶液置于-20℃保存或直接用于后续实验。

• CT转化效率低
  
  • 起始基因组DNA不纯或者使用量过多。请务必使用高质量的基因组DNA，而且基因组DNA的用量不宜过多，造成CT转化不充分。
    
  • CT转化试剂溶液配制及保存不当。严格按照说明书要求进行CT转化溶液的配制，并使CT转化试剂充分溶解，剩余的CT转化试剂溶液请置于-20℃避光保存；再次使用时需要将其室温完全解冻之后使用。
    
  • 脱硫步骤操作不当。CT转化产物纯化过程中，需要去磺化，请严格按照说明书要求加入相应量的去磺化试剂和保证充足的去磺化时间，期间保证磁珠处于悬浮状态。
• 得率低
  • 结合不充分。加入Buffer P3和MethMag Beads之后，请将其充分混匀，并使MethMag Beads处于悬浮状态；
    
  • 操作过程中丢失MethMag Beads。结合及洗涤过程中可能有少量的MethMag Beads粘在离心管管口上，吸弃上清前请用少量的上清液清洗管口，使粘在管口的MethMag Beads也吸附至管壁上。
    
  • 洗脱液不合适。洗脱缓冲液的pH值对洗脱效率有影响，如果使用水进行洗脱，请确保其pH值> 7.5，pH值过低可能导致低洗脱效率。
    
  • 取样量太多或者太少。请严格按照说明书操作。
• DNA样品不纯，抑制或者干扰后续实验反应
  • 乙醇有残留。请吸弃上清后从磁力架上取出离心管，放置2min之后再将离心管置于磁力架上30 s，吸净管底的液体。
    若出现残液的挂壁现象，请短暂离心之后将离心管置于磁力架上30 s，吸净离心管内的液体。
    
  • MethMag beads洗涤不充分。向离心管中加入70%乙醇以后，请充分混匀，使MethMag beads充分悬浮在70%乙醇中。
    
  • MethMag beads没有完全干燥，请将MethMag beads完全干燥，保证无乙醇残留。
    
  • 最后一步吸取上清时吸入MethMag beads。请确保所有MethMag beads吸至管壁上之后，再吸取上清。如果不小心吸入MethMag beads，请将上清液放回原管，待MethMag beads完全吸至管壁之后重新吸取上清。或者将吸取的DNA溶液10000rpm离心2min，再取上清。
    
  • 如果基因组DNA浓度过高，请将其稀释至100ng/μl。
• 获得的DNA断裂、降解
  • 样品没有按照要求保存。请使用新鲜样品，样品如果因为某些原因必须先行保存，可以将样品保存于-70℃冰箱。
    
  • 样品反复冻融。需要保存的样品应分割后保存于-70℃冰箱，避免反复冻融，确保样品的DNA未降解。
    
  • 操作过程过于剧烈，DNA被机械打断。请严格按照说明书操作。